寡核苷酸，即由数个至数十个核苷酸单体构成的短链DNA或RNA片段，是现代分子生物学研究的核心工具之一。作为关键试剂原料，它在基础科研、分子诊断、药物研发等多个领域都发挥着不可替代的作用。
尤为重要的是，寡核苷酸药物从转录后水平进行治疗，能够攻克难以成药的特殊蛋白靶点，具备治疗“不可成药”疾病的潜力，有望成为继抗体药物之后的现代新药第三次浪潮的引领者。
图1. 从遗传信息传递到创新药物
寡核苷酸（如siRNA、ASO）的生产主要依赖于固相化学合成技术，这与传统生物药（如抗体）的依赖细胞培养生产有本质区别。其核心工艺可分为三大阶段：合成、纯化和质量控制。而这些由核苷酸组成的短链分子，其功能发挥完全依赖于极高的纯度——纯化工艺，正是守护寡核苷酸价值的“生命线”。
图2. 寡核苷酸药物生产流程
寡核苷酸纯化工艺
寡核苷酸的合成是一个复杂过程，并非“一蹴而就”。尽管固相合成中单体的偶联效率较高，但合成后的寡核苷酸经过氨解切割等步骤后，所得粗品中仍会含有多种杂质，例如N-X和N+X寡聚物、修饰反应副产物以及不完全氧化/脱保护/带帽产物等。这些杂质对药品质量影响显著，甚至可能严重威胁临床应用的可靠性。
部分杂质（如碱基长度差异、碱基突变和硫代修饰等）在理化性质上较为接近，这就要求纯化过程具备高分辨能力——通常需要采用小粒径、高柱效的介质，以提高关键杂质去除率。此外，随着寡核苷酸原料、核苷酸单体及合成后修饰种类的日益增多，纯化环节面临的挑战也愈加严峻。
酸关键杂质序列
所以，固相合成之后的纯化中，如何选择合适的介质及纯化工艺对于产品质量和生产至关重要。在实际应用中，寡核苷酸的纯化工艺往往需要结合多种层析技术，以达到最佳的分离效果。目前主流的纯化方式主要是阴离子交换层析、反相层析和疏水层析。由于纯化工艺的差异，可结合其选择其中一种或者两种方式进行纯化。
图4. 离子交换层析
离子交换层析利用寡核苷酸磷酸基团的负电荷特性，通过固定相的带电配体通过静电吸附结合，再通过调节离子强度将目标分子与杂质分离。高载量的离子交换介质可有效降低单位产品的纯化成本，为寡核苷酸药物的规模化生产提供关键支撑。
NanoQ系列介质推荐
盛鸿国际科技NanoQ系列强阴离子介质性能优异，采用机械强度出众的PS/DVB作为基质，该基质经表面亲水改性后键合离子交换基团，既具备良好的生物相容性，又拥有稳定的物化特性，可显著提升分离纯化效率。NanoQ系列介质可提供10μm、15μm、30μm多种粒径选择，且兼容高压DAC装填工艺。其中，高分辨率的NanoQ-15L与NanoQ-30L尤其适用于寡核苷酸样品的纯化，是寡核苷酸下游纯化的理想介质选择。
表1. NanoQ系列介质参数
案例分享
案例1：NanoQ-15L纯化DMT-off反义寡核苷酸
5. NanoQ-15L纯化20mer寡核苷酸制备图谱
图6. NanoQ-15L纯化前后图谱对比（HPLC分析）
纯化结果：
在20 mer寡核苷酸的纯化中，采用NanoQ-15L进行规模纯化，粗品HPLC分析显示主峰纯度仅82.49%（图6黑色），主要杂质为N-1短链及DMT保护基残留。经优化线性洗脱，纯化后主峰纯度显著提升至97.45%（图6紫色），关键杂质控制达到：N-1<1.5%、DMT<0.3%。工艺收率约80%（按A260定量），符合cGMP要求的>70%标准。
案例2：NanoQ-30L 纯化DMT-on反义寡核苷酸
图7. NanoQ-30L纯化20mer寡核苷酸制备图谱
纯化结果：
结果显示，上样后短链DMT-off杂质通过低浓度盐溶液淋洗有效去除，然后进行在线脱保护基反应，再次淋洗去除脱落保护基，之后用盐浓度梯度洗脱DMT-off目标产物，收率> 85%。
案例3：NanoQ-30L 纯化寡核苷酸
图8. NanoQ-30L纯化寡核苷酸制备图谱
图9. NanoQ-30L纯化前后图谱对比（HPLC分析）
纯化结果：
采用NanoQ-30L纯化寡核苷酸，通过 HPLC对纯化前后样品进行分析。结果显示，粗品纯度约82%（图9黑色），其中含有工艺相关杂质、片段异构体等，经过纯化后，样品纯度得到突破性提升，最终达到97.2%（图9蓝色），关键杂质得到有效去除，满足质控标准。同时，收率保持在90%以上，实现了纯度和收率的兼顾。
盛鸿国际寡核苷酸生产整体解决方案
欢迎联系盛鸿国际，获取详细的整体解决方案PDF资料。
图10. 盛鸿国际寡核苷酸生产整体解决方案
关于盛鸿国际科技
苏州盛鸿国际科技股份有限公司（ 688690.SH）是一家以“以创新，赢尊重，得未来”为核心经营理念的国家高新技术企业。公司专注于高精度、高性能、高质量微球材料的研发与生产，是全球少数具备多品种、多规格微球产品供应能力的企业之一。
凭借持续的创新驱动，盛鸿国际科技致力于打造全球领先的纳米微球精准制备和应用平台，产品涵盖硅胶正相、反相、HILIC、手性介质、固相萃取、聚合物反相、离子交换、疏水层析、亲和层析（Protein A、金属螯合、苯硼酸）、复合模式、凝胶渗透色谱及特殊功能介质；整合旗下纳谱分析（色谱柱与应用）、福立仪器（分析仪器）、赛谱仪器（蛋白纯化系统）等子公司关键资源，成功构建了从色谱介质→色谱柱→分离/分析设备→智能化解决方案的全产业链闭环，打造全球领先的“色谱全生态平台”。
了解更多信息，敬请访问 www.mingjiai.com。
中小分子